La cytogénétique moléculaire

L’hybridation in situ en fluorescence ou FISH, de l’anglais fluorescence in situ hybridization) est une technique de cytogénétique moléculaire. Elle est basée sur les propriétés de renaturation des séquences complémentaires d’ADN.
La technique de FISH repose sur le principe de l’hybridation d’une molécule d’ADN marquée chimiquement avec une molécule fluorescente (sonde) avec une séquence cible complémentaire (métaphases ou noyaux).
Elle s’effectue aussi sur une coupe histologique de tissu, apportant ainsi des informations précises sur la localisation des acides nucléiques étudiés.

La très grande sensibilité de la FISH permet d’étudier un grand nombre de cellules et tout particulièrement les populations cellulaires qui ne prolifèrent pas.

Les types de sondes utilisées dans la cytogénétique moléculaire

Selon l’application recherchée, on utilisera différents types de sondes :

Sondes centromériques :

elles s’hybrident au niveau des centromères des chromosomes. Ces sondes sont surtout utiles pour dénombrer les chromosomes.

Sondes télomériques :

spécifiques des télomères des chromosomes

Sondes de peinture chromosomique :

elles sont constituées d’un ensemble de sondes de petite taille qui couvrent l’ensemble du chromosome. Après hybridation on observe un marquage de tout le chromosome. Il existe également des peintures spécifiques d’un bras ou même de quelques bandes chromosomiques. Ces sondes sont très utiles pour interpréter certaines anomalies complexes, mettre en évidence des échanges de petite taille, identifier précisément l’origine d’un fragment non identifié.

Sondes locus spécifique :

comme leur nom l’indique, ces sondes de petite taille permettent d’identifier une région très précise du génome. Leur intérêt principal réside dans la mise en évidence rapide de remaniements impliquant une région chromosomique précise ( microdélétions , translocations, inversions …)

Ces sondes peuvent être employées seules ou être combinées entre elles.

Quels sont les avantages de la technique FISH ?

Un des gros avantages de la technique FISH et qu’elle peut être utilisée sur de nombreux types d’échantillons :

• Préparations cytologiques : frottis, cytospins appositions
• Préparations histologiques : coupes congelées et coupes en paraffine (sauf fixation par le Bouin, prélèvement décalcifié et fixation plus que 24H).